Metoda colorimetrică pentru analiza chimică a sângelui

Metoda colorimetrică - analiză bazată pe compararea saturației culorii substanței de testat cu cea a substanței cunoscute. Rezultatele testelor fizico-chimice sunt de mare importanță pentru multe ramuri ale științei, dar cercetarea se aplică mai ales în medicină.

Esența metodei colorimetrice

Există mai multe tipuri de analiză care pot fi utilizate pentru a determina compoziția chimică a substanțelor. Unele sunt universale și sunt utilizate pe scară largă într-o mare varietate de aplicații, altele sunt specifice, mai precise. Metoda colorimetrică este una dintre metodele universale.

Esența analizei constă în compararea intensității culorii unei soluții de concentrație necunoscută cu cea a unei soluții etalon. În cadrul unei analize, se formează un compus colorat ca urmare a interacțiunii unui component de testare cu un reactiv specific. După încheierea reacției, se compară nuanța de culoare obținută cu cea a soluțiilor a căror concentrație este deja cunoscută.

Robert Boyle este considerat a fi fondatorul colorimetriei. El a folosit o stoarcere de taninuri pentru a distinge între fier și cupru în soluție. A fost Boyle observat, Cu cât concentrația de fier din soluție este mai mare, cu atât tonul acesteia este mai saturat.

Colorimetrie

Colorimetria este o metodă de determinare a cantității unei substanțe în soluții. Se aplică legea lui Bouguer-Lambert-Bera: atunci când un fascicul de lumină intră într-un strat dens și absorbant de material, intensitatea sa scade.

Metoda colorimetrică pentru determinarea concentrației unei substanțe poate utiliza fie o comparație vizuală, fie o comparație cu un instrument care măsoară intensitatea culorii. Se pot face comparații folosind metodele directă și compensată.

1. Direct. Compararea culorii unei soluții de testare la o anumită densitate și temperatură cu o soluție de referință. Apa distilată este utilizată ca soluție de referință în fotocolorimetre și spectrofotometre. Dispozitivele măsoară intensitatea curentului, care depinde de intensitatea luminii.
2. Compensații. Metoda se bazează pe colorația probei care urmează să fie testată. Acest lucru se realizează prin adăugarea unui solvent sau prin creșterea grosimii mediului de colorare.

Utilizarea unui spectrofotometru, a unui monocromator sau a altor instrumente de precizie simplifică și mai mult procesul, deja necomplicat metoda de testare și permit obținerea unor rezultate mai precise. Aceste instrumente sunt capabile să măsoare transmitanța luminii și să determine lungimea de undă.

În cazul în care se utilizează analiza

Metoda colorimetrică de analiză se aplică atunci când se cunoaște compoziția chimică exactă, când este disponibilă o probă de referință pentru comparație și când temperaturile probelor de testare și de referință sunt identice. Atunci când cantitatea de material colorat trebuie determinată rapid, dar este atât de mică încât nu se poate aplica nicio metodă analitică.

Colorimetria este utilizată pe scară largă în medicină pentru cercetări biochimice clinice și alte aplicații:

• Industria farmaceutică;
• Industria alimentară și a alcoolului;
• Agronomie (determinarea calității solului).

Avantaje și dezavantaje

Metoda colorimetrică, ca orice altă metodă, are avantaje și dezavantaje.

Avantajele includ următoarele:

• Simplicitatea analizei, un minim de proceduri pregătitoare;
• Posibilitatea de a testa chiar și cu cantități mici de material de testat;
• Nu este nevoie de echipamente scumpe, deși se folosesc din ce în ce mai mult dispozitive moderne, care nu sunt ieftine. Dar pentru a asigura cele mai precise rezultate.

Dezavantaje: Precizie analitică scăzută în comparație cu metodele analitice.

Metoda Biuret de determinare a proteinelor

Proteinele serice sunt un indicator al stării de homeostazie. Creșterea concentrației compus cu greutate moleculară mare O concentrație ridicată de proteine în sânge se numește hiperproteinemie, în timp ce o concentrație scăzută se numește hipoproteinemie.

Proteinele din serul sangvin au compoziție, structură, proprietăți și funcții diferite. Acestea sunt împărțite în enzime, hormoni, imunoglobuline și alte. Toate grupele de proteine au în comun anumite caracteristici, care au condus la dezvoltarea unor metode de determinare a compușilor organici cu greutate moleculară mare în fluidele biologice.

Dintre toate metodele de biochimie clinică, metodele colorimetrice de determinare a proteinelor sunt cele mai frecvent utilizate. Acestea sunt relativ ieftine, ceea ce este important pentru Analiza se efectuează în dimineața zilei. și destul de simplu. Cea mai frecventă este metoda biuretei. Esența metodei: Proteinele din mediu alcalin reacționează cu sulfatul de cupru pentru a forma compuși de culoare purpurie. Pe baza saturației colorației, conținutul de proteine din sânge poate fi determinat prin. Biomaterialul pentru test este luat dimineața pe stomacul gol.

Testul este foarte precis, dar există factori care afectează concentrația de proteine din sânge:

• Activitate fizică cu puțin timp înainte de prelevarea biomaterialului;
• Ultimele săptămâni de sarcină și perioada de alăptare;
• utilizarea corticotropinei, a Misclaironei, a Clofibratului, promovează un conținut mai mare de proteine în sânge, în timp ce utilizarea pirazinamidei și a estrogenilor duce la o concentrație mai mică;
• Poziționarea necorespunzătoare a mâinilor în timpul prelevării de probe de biomateriale.

Determinarea fierului

Fierul din sânge este un parametru de bază pentru diagnosticarea diferitelor boli. Substanța este concentrată în hemoglobină, care asigură transportul oxigenului către țesuturi. Pentru determinarea fierului prin metoda colorimetrică, ca reactiv de bază se utilizează adesea o soluție de bafofenantrolină (0,02%). Biomaterial - ser fără urme de hemoliză.

Esența metodei: interacțiunea dintre ionii de fier divalent și bafofenantrolina sulfatată formează un complex colorat, a cărui saturație se determină fotometric. Pentru a obține o soluție clară, trebuie respectate regulile de colectare a biomaterialelor, dar pentru determinarea exactă a densităților optice ale complexelor fier-ligand, fierul se eliberează din hemoglobină cu hidroxilamină și detergenți (dodecil sulfat de sodiu). Rezultatele testelor sunt folosite pentru a determina prezența și amploarea anomaliilor. Concentrația normală de fier ar trebui să fie

• 14,2 - 26,0 µmol/l (bărbați);
• 10,6 - 21,7 μmol/l (femei).

Deficitul de fier este de obicei asociat cu pierderea de sânge, ingestia inadecvată sau absorbția slabă în tractul gastrointestinal.

Determinarea colesterolului

Colesterolul este o substanță organică care se găsește în membrana celulară a multor organisme, inclusiv a oamenilor. Acesta Este esențial pentru producția de Cholecalciferol și hormoni steroizi. Nivelurile de colesterol de 3,37-5,2 mmol/l sunt considerate normale. Creșterea conținutului de - este unul dintre principalele motive pentru dezvoltarea aterosclerozei.

Metodele colorimetrice de determinare a colesterolului permit detectarea precoce a bolilor vasculare. Rezultatele patologice pentru ischemia fatală sugerează o concentrație de fier lipofilic de 6,5-7,8 mmol/l.

Principiul metodei colorimetrice constă în faptul că colesterolul este oxidat de 3beta-hidroxi steroid oxidoreductaza cu eliberare de peroxid de hidrogen, care transformă p-aminoatipirina într-un compus colorat. Conținutul de colesterol se determină prin saturația culorii sale.

Atunci când se testează un copil, concentrațiile de colesterol la copii nu trebuie să depășească 4,1 mmol/l.

Ce este metoda colorimetrică enzimatică?

Testele enzimatice se bazează pe reacții cu enzime foarte active. Acestea sunt utilizate pe scară largă în chimia analitică pentru a determina substanțe de la ioni de nitrat la macromolecule.

Metodele enzimatice sunt specifice, permițând analiza unor substanțe în prezența unor substanțe similare. Cea mai frecventă metodă se bazează pe utilizarea unei enzime, glucoxidază. Testul este utilizat pentru a determina concentrația de glucoză din sânge. Precizia testului permite utilizarea acestuia pentru a ajusta doza de medicamente hipoglicemiante la pacienții cu diabet de tip 2.

Metoda glucozei-oxidant este considerată una dintre cele mai bune metode cantitative de determinare a glucozei. Sângele (capilar) și serul pot fi utilizate ca biomaterial, dar plasma este preferată deoarece are un nivel mai scăzut de hematocrit, ceea ce afectează negativ acuratețea rezultatului.

Metoda fotometrică cinetică este utilizată în principal. Raportul dintre glucoză-oxidază și peroxidază asigură că, pentru o anumită perioadă de timp după începerea reacției, compusul colorat se va forma la o rată proporțională cu nivelul de glucoză din probă. Principalul avantaj al testului este că rezultatul nu este afectat de compușii prezenți în probă. Metoda are un dezavantaj - testul necesită echipamente de măsurare costisitoare de la producătorii germani sau suedezi.

Concluzie

Metoda colorimetrică este precisă și ușor de utilizat. Utilizarea sa în medicină permite detectarea timpurie a diferitelor modificări patologice în organism. Odată cu introducerea de noi tehnologii, metoda se îmbunătățește și devine tot mai populară.