O aplicație a reacției foges-proskauer pentru diferențierea microbiologică a enterobacteriaceae

În identificarea diferențială a Enterobacteriaceae și a unor Vibrio, reacția Foges-Proskauer ocupă un loc special. Testul se bazează pe capacitatea bacteriilor de a fermenta glucoza pentru a forma acetoină.

Esența procesului de cercetare

În microbiologie, reacția Foges-Proskauer este adesea utilizată pentru a diferenția în cadrul familiei Enterobacteriaceae yersiniae (inclusiv agenții cauzali ai pseudotuberculozei și enterocolitei), E. coli, aerobii sporulatori. Rezultatul este vizualizat prin colorarea mediului prin adăugarea anumitor reactivi.

Acest test face parte din seria IMViC (abrevierea Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate), un grup de teste de identificare care implică determinări diferențiale:

• cu indol, bazat pe scindarea triptofanului în indol, utilizat în prezența reactivului Kovacs sau Ehrlich;
• Folosind metilroth, sau roșu de metil, care detectează un anumit pH ca rezultat al metabolismului glucozei;
• Reacția Foges-Proskauer pentru detectarea acetilmetilcarbinolului
• eliminarea citratului cu schimbarea culorii Rezultatul este un mediu alcalin.

Esența procedeului constă în vizualizarea prezenței bacteriilor care urmează să fie diagnosticate prin interacțiunea acetoinei formate de acestea cu potasiul caustic în prezența oxigenului. Are loc oxidarea acetil-metilcarbinolului în diacetil, care formează un compus de culoare roșu aprins sau roz. Aceștia măresc sensibilitatea testului prin introducerea alfa-naftolului înainte de adăugarea de potasiu caustic.

Efectuarea testului

Reacția Foges-Proskauer implică pre-culturi de microorganisme. O cultură pură este inoculată în mediul de diagnostic diferențial Clarke, o variantă a acestuia fiind bulionul Clarke (fără adaos de agar-agar). Se utilizează un mediu ușor de procurat sau un mediu preparat de unul singur. Compoziția include:

• 5 g de peptonă;
• 5 g de glucoză;
• 5 g de fosfat de potasiu bicarbonat;
• 1 litru de distilat.

În timpul testului, cultura este inoculată cu o ansa bacteriologică sterilă în mediu lichid. Cantitate - 5 ml în eprubetă plus martor. Incubare la 35-37 grade timp de două zile. Apoi se realizează reacția Foges-Proscauer în mod progresiv:

1. 2,5 ml de cultură pe bulion se transferă într-o eprubetă sterilă.
2. Se adaugă șase picături de alfa-naftol (soluție alcoolică de 5%).
3. Adăugați o soluție de 40% de potasă caustică în cantitate de 0,1 ml, sau două picături.
4. Amestecul se face prin agitarea ușoară a eprubetei.
5. Evaluați rezultatul după 15 minute de la începerea experimentului.

O metodă alternativă de testare este incubarea peste noapte, care este redusă la 18 ore sau peste noapte. În plus față de această metodă, se utilizează și un test expres: buclă în 2 ml de mediu de cultură, incubați timp de aproximativ patru ore, apoi adăugați reactivi într-o cantitate egală de 2-3 picături, amestecați și evaluați rezultatul după zece minute.

Controlul este unul dintre agenții cauzali ai Klebsiella pneumoniae, tulpina atcc 13883.

Evaluarea rezultatului

După expirarea timpului necesar de la adăugarea reactivilor (5-15 minute), trebuie să se observe o colorare în roșu cireșe cu o reacție pozitivă puternică, o colorare în roșu și roz cu o reacție pozitivă slabă. Nicio modificare înregistrată ca rezultat negativ.

Un exces de potasă caustică în soluție poate da o reacție pozitivă simulată, cupru colorat. În acest caz, trebuie înregistrat un răspuns negativ al coloniei testate. Colorația cu cupru apare și în cazurile în care evaluarea se face la o oră după introducerea reactivilor.

La evaluarea rezultatelor trebuie să se țină seama de faptul că o cultivare prelungită a microorganismelor de testat (mai mult de trei zile) duce la o acidificare a mediului, ceea ce poate duce la un rezultat incorect al testului. Reacția poate fi ușor pozitivă sau fals negativă.

Cerințe privind reactivii de testare

Reactivii utilizați pentru reacția Foges-Proskauer trebuie să îndeplinească următoarele cerințe, ca fiind corectă Concentrație, puritate ridicată și stabilitate, care se realizează prin respectarea regulilor de depozitare.

Trusele de testare gata preparate conțin de obicei reactivi pentru 100 sau mai multe aplicații și sunt prezentate în flacoane de plastic sau de sticlă colorată. Calitatea este reglementată documentația relevantă.